SuperScript III 第一鏈合成系統(tǒng)試劑盒
Invitrogen SuperScript III 第一鏈合成系統(tǒng)試劑盒
用于 RT-PCR 的 SuperScript™ III 第一鏈合成系統(tǒng)經(jīng)過優(yōu)化，以從純化 poly(A)+ 或總 RNA 合成第一鏈 cDNA。使用該系統(tǒng)可檢測 100 bp 至 >12 kb 的 RNA 靶標(biāo)。起始材料量的范圍為 1 pg – 5 µg 總 RNA。SuperScript™ III 反轉(zhuǎn)錄酶是一款 M-MLV 反轉(zhuǎn)錄酶，其經(jīng)過基因改造以降低 RNase H 活性和提高熱穩(wěn)定性。該酶可用于在 42–55°C 溫度范圍內(nèi)合成 cDNA，相對于其他反轉(zhuǎn)錄酶，具有更高的特異性和 cDNA 得率以及更多的全長產(chǎn)物。因?yàn)?SuperScript™ III RT 不會受到核糖體和轉(zhuǎn)運(yùn) RNA 的顯著抑制，所以其可用于從總 RNA 制備物合成第一鏈 cDNA 的過程。
使用 SuperScript™ III 第一鏈系統(tǒng)
在第一步中，使用總 RNA 或 poly(A)+ 選定 RNA（由 oligo(dT)、隨機(jī)引物或基因特異性引物引發(fā)）合成 cDNA 。在第二步中，在另一根管中使用目標(biāo)基因特異性引物進(jìn)行 PCR。對于 PCR 反應(yīng)，我們推薦使用以下 DNA 聚合酶之一：Platinum™Taq DNA 聚合酶可提供自動(dòng)熱啟動(dòng)條件，使特異性提高至 4 kb，Platinum™Taq 高保真 DNA 聚合酶可為高達(dá) 15 kb 的靶標(biāo)提供更高的得率和高保真度，而 Platinum™Pfx DNA 聚合酶可為高達(dá) 12 kb 的靶標(biāo)提供極大保真度。
Invitrogen SuperScript III 第一鏈合成系統(tǒng)試劑盒
• Oligo(dT)20，50 μL (50 μM)
• 隨機(jī)六聚體，250 μL (50 ng/μL)
• 10X RT 緩沖液，1 mL
• DTT，250 μL (0.1 M)
• 氯化鎂，500 μL (25 mM)
• dNTP 混合物，250 μL (10 mM)
• SuperScript III RT，50 μL (200 U/μL)
• RNaseOUT，100 μL (40 U/μL)
• 大腸桿菌 RNase H，50 μL (2 U/μL)
• DEPC 處理水，1.2 mL
• 總 HeLa RNA，20 μL (10 ng/μL)
• 正義鏈對照引物，25 μL (10 μM)
• 反義鏈對照引物，25 μL (10 μM)
儲存在 –20°C 下。
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